小鼠肺微血管内皮细胞构成了一种半选择性的屏障，这一屏障在肺部气体交换、液体及可溶物质在血液与肺间质之间的流动调节中扮演着重要角色。此外，这些细胞还具备代谢功能，能够执行部分非呼吸相关的生理功能。在肺损伤的情况下，肺微血管内皮细胞成为活性氧类的重要靶细胞之一。在肺炎发生期间，神经体液介质和氧化剂会作用于内皮细胞，导致细胞间隙渗透性增加，从而使得血液中的蛋白质进入间质。这一变化最终会导致低氧血症，进而引发成人呼吸窘迫综合征和非心源性肺水肿。

小鼠肺微血管内皮细胞来源于实验动物的正常肺组织。这些细胞呈上皮样，还有多角形的特征，可进行贴壁培养，使用CD31免疫荧光染色进行鉴定，确保其阳性且纯度高于90%。该细胞系不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌，确保了研究结果的可靠性。

实验所需仪器设备及试剂

1. 仪器

• 生物安全柜 BSC-1500ⅡA2-X
• CO2细胞培养箱 BC-J160S
• 荧光倒置显微镜 DS-Ri2
• 高速冷冻离心机 MultifugeX1R
• 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A
• 电热恒温震荡水槽 DK-2B

2. 试剂耗材

• T25细胞培养瓶 430639
• 血球计数板 Neubauer improved
• 24孔板专用细胞爬片 YA0350
• 细胞培养孔板 WHB-24
• 胎牛血清 1414426
• 内皮细胞培养基 Primed-icell-0020
• 25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA） 1734858

小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法

1) 将5-10天龄的乳鼠浸泡于75%乙醇中，然后移入生物安全柜。

2) 进行胸部解剖，取出双肺并置于预冷的PBS中，尽量去除结缔组织等杂质。

3) 剪取肺边缘部分，将组织块移入T25培养瓶中，然后倒置于细胞培养箱内。

4) 在2小时后，向培养瓶中添加2 mL内皮培养基，确保瓶子正置，避免组织块漂浮。

5) 每3天更换2 mL培养基，待细胞逐渐从组织块中爬出后，每隔2天更换一次培养基。当细胞融合度达到60-70%时，删除组织块，并将肺微血管内皮细胞转移至新瓶中进行进一步培养。

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